Isolation and identification of human metabolites from a novel anti-tumor candidate drug 5-chlorogenic acid injection by HPLC-HRMS_MSn and HPLC-SPE-NMR
這篇論文研究了新型抗腫瘤候選藥物5-綠原酸（5-CQA）注射液在人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。
人體肌肉注射注射用綠原酸后，尿液鑒定程序
研究背景
1、5-CQA注射液是一種新型的抗腫瘤候選藥物，目前正在中國進行臨床試驗（I期）。然而，關于其在人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物尚不明確。
2、研究藥物代謝產(chǎn)物的難點在于代謝產(chǎn)物的多樣性和復雜性，尤其是在復雜的生物樣本中分離和鑒定這些代謝產(chǎn)物。
3、已有研究表明，5-CQA具有多種藥理活性，包括抗菌、抗氧化、鎮(zhèn)痛、解熱和抗癌作用。然而，關于5-CQA在人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物研究較少，特別是在肌肉注射后的代謝情況。
研究方法
1、使用高效液相色譜-高分辨質譜（HPLC-HRMS/MS^n）和高效液相色譜-固相萃取-核磁共振（HPLC-SPE-NMR）技術分析了健康成人肌肉注射5-CQA注射液后的尿液和糞便樣本。
2、樣品制備包括尿樣和糞樣的收集與處理。尿樣在第一天分三段（0-3小時、3-4小時和4-6小時）收集，第二天到第五天收集0-3小時的尿樣。糞樣在給藥后第一天0-24小時內(nèi)收集。
4、HPLC-HRMS/MS^n分析條件包括使用Waters Symmetry C18柱（250 mm × 4.6 mm, 3 μm），流動相為0.1%甲酸水溶液和甲醇，流速為0.9 mL/min，使用負離子模式進行檢測。
5、HPLC-SPE-NMR分析條件包括使用Agilent 1260系統(tǒng)，分離模式為梯度洗脫，使用Hysphere GP-phase SPE柱進行目標化合物的富集。
實驗設計
1、在尿液樣本中，共鑒定出六種代謝產(chǎn)物，包括異構化的5-CQA（P1和P2）、水解的5-CQA（M1和M2）和甲基化的5-CQA（M3和M4）。其中，M3和M4是主要的代謝產(chǎn)物。
2、使用HPLC-SPE-NMR技術對M3和M4的結構進行了表征，結果顯示M3和M4的甲氧基分別位于C-3′和C-4′。
3、由于沒有商業(yè)參考品，M3和M4的純品通過5-CQA甲基化合成并進行分離純化。合成樣品經(jīng)過HPLC分析和NMR驗證，確認其與尿液樣本中的M3和M4為同一化合物。
結果與分析
1、通過HPLC-HRMS/MS^n方法，成功鑒定了尿液中的六種代謝產(chǎn)物，并確認M3和M4為主要代謝產(chǎn)物。
2、HPLC-SPE-NMR分析結果顯示，M3和M4的甲氧基分別位于C-3′和C-4′，進一步驗證了其結構。
3、反向分子對接分析預測了M3和M4對惡性膠質瘤相關靶點的潛在活性，結果顯示M3和M4在多個惡性膠質瘤相關通路中具有多種相互作用。
總體結論
1、這是首次闡明5-CQA注射液甲基化代謝產(chǎn)物M3和M4的結構，并支持了臨床人體質量平衡研究。
2、研究結果為理解5-CQA注射液在人體內(nèi)的代謝提供了新的見解，并為其臨床應用提供了支持。
通過這篇論文，研究人員詳細研究了5-CQA注射液在人體內(nèi)的代謝情況，并為進一步的臨床研究提供了重要的實驗數(shù)據(jù)和理論支持。